胸苷激酶 1(TK1)C端区的特别序列

人胸苷激酶 1（TK1）在细胞周期中的调控已进行了详尽研究。出国治病机构爱诺美康了解到，Kauffman&Kelly发现，人TK1 C端的40个氨基酸序列是在细胞周期中调控TK1活性和浓度的关键序列。

出国治病机构爱诺美康了解到，为了进一步评估人TK1的C端区域参与细胞周期调控的价值，研究人员构建了缺失这40个氨基酸的C端序列的突变型的编码基因。

构建的该突变体，使得在Ala-193和正常的TK终止密码子之间不引入新的氨基酸。

将突变体（MTEpTKcrA40)转染到LTK_(鼠成纤维细胞TK1阴性）细胞中，并带有G418(氨基糖苷类抗生素遗传霉素）的细胞培养基中选择稳定的转化体。

此转化体表达免疫活性多肽为21K，与预期的相符。此外，也可以在HAT培养基中选择由MTEp TKcrA40转化的Ltk细胞，说明这21K多肽具有酶活性。

出国治病机构爱诺美康了解到，采用转化细胞提取物检测酶活性水平的同时，用21K多肽免疫得到的抗体进行免疫反应，结果指出，此蛋白质的比活性与野生型TK蛋白质的比活性相似。然后通过使用三个独立的TKcrA40转化的克隆和10个TKcrA40转化体库，研究C端40个氨基酸缺失对TK的细胞周期调控的影响。

通过离心淘析获得来自细胞周期不同组分的细胞，并分析TK活性。在所有五个独立的淘析实验中，TK活性在整个细胞周期中变化降低了3倍。

出国治病机构爱诺美康介绍，通过免疫印迹测定发现，剪切型21K多肽免疫的抗体，TK1的水平表达在细胞周期的各期呈现并无有意义改变，删除C端的40个氨基酸残基，TK1在细胞周期调控功能丧失。然而，仅删除C端的后10个残基，不影响细胞周期调控。TK1的C端区域含有特定的序列KEN(赖氨酸、谷氨酸、天冬氨酸），近期已被证明是通过有丝分裂后期促进复合体/环指体-钙黏蛋白介导的途径，在有丝分裂期调节TK1的降解。这对于了解TK1在细胞周期中的调控是非常重要的发现。因此，在哺乳动物细胞中的细胞周期调控，泛素-蛋白酶体途径负责有丝分裂期中TK1的降解。