肺癌基于蛋白层面的IHC法

免疫组化法(IHC法)检测技术:用于检测与人体组织或细胞标本。美国看病机构爱诺美康了解到，免疫组化法（IHC法）检测技术：用于检测与人体组织或细胞标本。鉴别形态很相似的疾病或肿瘤，确定组织来源及研究肿瘤组织代谢改变，它包括细胞内酶学的变化、糖原的变化、核酸的变化。

美国看病机构爱诺美康了解到，肺癌基于蛋白层面的IHC法常规IHC技术，常规IHC优势:简单易行、价格便宜、操作方法成熟，在多数医院均能开展，是一种有效的筛查方法。

与FISH比较，IHC可以观察组织结构和细胞形态，对恶性细胞数量的需求不像FISH那么严格，只要标本中含有几簇肿瘤细胞即可进行IHC检测。并且可以用于多种类型标本的检测，包括FFPE组织块、体液和FiNA细胞包埋块或涂片标本。

现有数据表明ALK融合蛋白IHC检测阳性与克唑替尼临床疗效之间存在相关性，常规IHC强阳性与FISH阳性之间具有高度一致性，IHC3+到0分患者FISH检测阳性率分别为97.4%、62.5%、14.3%和0。

美国看病机构爱诺美康了解到，结果判读:ALK显色在细胞质，有些病例也可见细胞膜着色。染色呈颗粒状。各实验室对ALKIHC阳性的判读标准并不一致。

《中国间变性淋巴瘤激酶(ALK)阳性非小细胞肺癌诊断专家共识(2013版)》推荐常规1HC检测ALK蛋白表达的判读标准为:IHC3+:>5%的肿瘤细胞呈现颗粒状细胞质强着色;IHC2+:>5%的肿瘤细胞呈现细胞质中度着色;IHC1+:>5%的肿瘤细胞呈现细胞质微弱或模糊着色或<5%的肿瘤细胞呈现细胞质有任何程度的着色;IHC0:肿瘤细胞无着色。

组织学上，需要小心解释含有黏液细胞如印戒细胞的ALK免疫组化染色。细胞内的黏液空泡可能会掩盖较弱的细胞膜染色，使印戒细胞中的阳性染色较难观察到。另外，需要注意细胞膜的非特异染色，有些FISH阴性的肺癌存在细胞膜染色，特别是在细胞腔缘部位。

美国看病机构爱诺美康介绍，这一现象不仅见于肿瘤细胞，也见于非肿瘤细胞，如反应性n型肺泡上皮细胞。一些神经内分泌癌也会呈现ALKIHC阳性反应。另外，一些肿瘤中存在染色异质性，这种异质性可能主要与固定的异质性相关。在活检标本中，延迟固定并不影响ALK蛋白质的敏感性，但当使用存档标本制作组织芯片进行ALK筛查时，延迟固定可能会对ALK蛋白质的敏感性产生影响（图2)。

图2 ALK免疫组化结果中潜在的陷阱

美国看病机构爱诺美康介绍，常规IHC存在的问题:

①对非小细胞肺癌ALK免疫组化，目前还没有统一的操作规范。各实验室所使用的抗体类型或来源、抗原修复和抗体检测程序、信号增强技术等各不相同;

②不同品牌抗体的敏感性和特异性不同，目前认为D5F3(Cell Signaling公司）和5A4(Novocastra)两个抗体比ALK1抗体（Dako公司）更敏感和更特异，检测ALK融合蛋白的敏感性可达100%和95%~99%;

③常规IHC判读ALK融合蛋白阳性的标准尚未统一;

④由于ALK蛋白表达与神经外胚层分化相关，在小细胞肺癌和正常人脑组织可能存在ALK蛋白表达，因此不建议在小细胞肺癌使用IHC检测ALK蛋白。