间变性淋巴瘤激酶ALK阳性非小细胞肺癌诊断

qRT-PCR法基于PCR扩增的实时定量RT-PCR法具有快速简便、能同时明确已知融合基因类型等优点。国外看病机构爱诺美康了解到，研究显示，其原理是在融合位点两侧设计特异性引物和探针，通过多重引物RT-PCR法，检测XL ALK基因融合。

国外看病机构爱诺美康了解到，目前，已获CFDA批准的RT-PCR法检测AKL融合基因的商品化试剂盒，能够检测7种融合基因突变。灵敏度较高，仅需100~500ng肿瘤组织的RNA即可完成检测。并且多种样本类型均适用，包括各类新鲜组织样本以及细胞学样本等。

比较定量RT-PCR除了qRT-PCR法外，比较定量RT-PCR法也可用于ALK基因重排检测。国外看病机构爱诺美康介绍，这主要是基于ALK重排是ALK异常表达的更常见原因，这一原理除了适用于IHC检测ALK蛋白表达，也适用于ALK转录子表达。断裂点恒定地位于保留嵌合转录子致癌激酶结构域(外显子20)前面的位置，因此当与其他基因发生融合时，ALK的3'和5'区的转录子是不同的。基于此，外显子阵列技术可以用于检测常见的融合类型以及鉴定新的融合类型。基于PCR法的纳米技术也可用于ALK检测。

这种基于mRNA水平的3'和5'区比较检测的更大优点在于可以同时独立检测各种ALK融合模式。

国外看病机构爱诺美康介绍，其他基于PCR的检测方法RACE-PCR联合测序法，该方法采用cDNA末端快速扩增技术结合两轮PCR技术来富集扩增ALK基因的融合变异体，敏感性较高，能够明确具体的变异类型。该方法适用于各种新鲜组织和细胞学样本。

引物特异性RT-PCR联合测序法，是确认NSCLC存在融合基因的另一种快速诊断方法。其优势在于检测突变转录本的高敏感性，发现扩增产物即意味着融合基因阳性。

基于PCR方法的不足，(1) 该方法检测的样本是RNA，RNA易降解，对样本提取和保存的要求较高，国内有些实验室不具备严格的质量控制条件。

国外看病机构爱诺美康介绍， 目前已经发现20余种ALK认融合基因突变体，可能仍有未知的突变体存在，而RT-PCR法无法检测未知的融合基因突变类型。以下列举了几种常用融合基因检测方法的优点和不足(下图)。

荧光原位杂交（FISH)，免疫组织化学（IHC)和定量RT-PCR(qRT-PCR)方法比较  

ALK基因融合作为晚期NSCLC第二个明确应用于临床的分子分型，其诊断方法和检测流程仍需进一步结合临床数据加以优化。2013版《中国间变性淋巴瘤激酶ALK阳性非小细胞肺癌诊断专家共识》根据目前各种检测方法的优缺点，临床样本的特点和实验室条件，提出了ALK阳性NSCLC诊断流程，并将根据实际情况定期更新，以期能为进一步优化阳性肺癌患者的诊断和治疗提供指导。