VECTASTAIN®ABC(生物素-亲和素系统）检测系统

VECTASTAIN&ABC系统是与预先形成的亲和素-生物素化酶复合物相关的活性酶分子，因此非常敏感。出国治病机构爱诺美康了解到，该复合物利用亲和素的两个重要性质：①对生物素的极高亲和力（超过100万倍，高于大多数抗原的抗体）；②含有4个生物素结合位点。

这些特性允许提前将Avidin DH(试剂A)与其配对的生物素化酶（试剂B)混合形成大分子复合物（ABC)。VECTASTAIN®ABC试剂可用于检测任何生物素化的分子，该属性使得ABC方法在可以检测的目标类型及检测对象方面具有很大的通用性。

出国治病机构爱诺美康了解到，将甲醛固定的石蜡包埋样品制备成4Mm厚的组织切片，将切片脱蜡水化，为了反映组织中的TK1活性，将切片在95~99T：下浸入目标溶液（Dakocytomation，S1700，DAKO，Denmark)中30分钟，根据制造商说明书（Vector Laboratories,CA，USA)中描述的ABC技术进行组织化学染色，将切片用3%FI202孵育5分钟，以阻断内源性过氧化物酶，通过用正常马的血清(Vector Laboratories)孵育切片来阻断非特异性结合位点。在室温下用适宜浓度的抗TK1单克隆抗体或抗Ki-67单克隆抗体孵育2小时后，将切片在PBS中冲洗。

在室温下采用生物素标记马抗小鼠（稀释1:200，Vector Laboratories,CA,USA)40分钟，加人辣根过氧化物酶（HRP)的链霉亲和素复合物（稀释1:100)，然后在室温下孵育40分钟，二氨基联苯胺（DAB)用作显色底物。制片可用苏木精复染色。

作为阴性对照，在每个实验组中将培养细胞用PBS代替一抗进行孵育，或者将正常组织作为平行对照染色，以评估单克隆抗体在肿瘤组织中的特异性，为了检测抗体的特异性，使用TK1抗体-免疫抗原肽复合物进行竞争实验。

采用载玻片离心分离细胞与抗TK1抗体染色方法类同上述方法，用PBS缓冲液稀释，制备抗体的#佳浓度，在41孵育过夜，洗涤，按照文献说明进行，通过辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素复合系统（ABC试剂盒）染色载玻片。