細胞免疫荧光染色技术

根据免疫荧光技术的程序，将离心细胞的载玻片或组织切片用Texas Red生物素D或FITC生物素D染色。出国就医机构爱诺美康了解到，采用双标记免疫荧光技术，在室温下将PC-3和HeLa细胞经过细胞离心后固定在4%多聚甲醛的载玻片上30分钟，然后浸入0.5% Triton X 100中5分钟。

出国就医机构爱诺美康了解到，在PBS中洗涤细胞后，将载玻片与正常血清一起孵育，然后与抗TK1抗体(5~10μg/ml)—起孵育4℃。随后，将载玻片洗涤并与FITC标记的抗兔二抗（DAKO，丹麦，1:20稀释于PBS中）或与Texas Red(生物素D(4,6-二脒基-2-苯基吲哚二氢胆碱酯）缀合的生物素化抗体结合。使用DAPI(Sigma，5μmol/L在PBS中）来复染细胞核。

为了确定TK1与细胞丝体系之间的关系，TK1用FITC染色，细胞丝直接用罗丹明鬼笔环肽（Molecular Probes,Eugene，OR,1:100稀释在PBS中）染色5分钟。为了鉴定S期细胞，将人PC-3细胞用10μmol/L BrdU (Sigma，St.Louis,MO)在RPMI1640培养基中标记30分钟（37℃环境）。

出国就医机构爱诺美康介绍，由于HC1使DNA变性影响了TK1的染色能力，在将DNA通过2mol/L HC1处理变性1小时之前，首先用Texas Red生物素DPC-3细胞。在PBS中洗涤后，细胞标本中加人抗BrdU(德国Boehringer Mannheim, 6μg/ml的PBS中加入0.1% BSA)，并用抗小鼠IgG-FITC(Boehringer Mannheim,Germany，1:30在PBS中）染色30分钟。