DAKO EnVision™染色和过氧化物酶ABC系统的研究

DAKO EnVision™试剂盒是一种过氧化物酶（辣根过氧化物酶，HRP)缀合的聚合物主链。美国治病机构爱诺美康了解到，此外还携带针对兔或小鼠免疫球蛋白的二抗分子。聚合物共轭物含有多达100个酶分子，每个骨架多达20个抗体分子提供了一个简单、敏感的可视化系统。它是一种易于使用的系统，其避免了内源性生物素干扰的可能性，并且通过稀释一抗来降低每次检测的成本。作为一个两步的过程，它减少了测定时间和工作量。在石蜡包埋切片的临床应用中DAKO EnVision™染色和过氧化物酶ABC系统的敏感性相似。

由甲醛固定石蜡包埋的标本通过脱蜡和复水制备切片（4μm厚)，为了恢复组织中的TK1活性，将切片与Target Retrieval溶液（Dakocytomation，S1700,DAKO,Copenhagen,Denmark)一起温育。使用DAKO EnVision™系统，根据制造商的说明书进行组织化学染色。

简言之，将切片用3%H₂0₂孵育5分钟以阻断内源性过氧化物酶活性，通过与EnVision试剂盒中包含的封闭缓冲液孵育来阻断非特异性结合位点，用抗TIC1单克隆抗体[华瑞同康生物技术(深圳）有限公司]的优稀释液孵育后，加入EnVision缀合物，室温孵育15分钟。使用二氨基联苯胺作为色原体，并将载玻片用苏木精复染色，使用正常组织（远离肿瘤组织和病理诊断证实为正常组织）作为对照评估单克隆抗体在肿瘤组织中的特异性，TK1阴性人淋巴瘤（CEM)细胞也可用作对照。