cfDNA/ctDNA检测的临床意义和检测方法

cfDNA/ctDNA检测的临床意义和检测方法

1.临床意义

(1) cfDNA/ctDNA检测具有高度特异性和疗效预测的准确性，目前所发表的研究数据一致证实了血浆cfDNA/ctDNA   突变检测的特异性在90%以上，并能够预测EGFR-TKIs的疗效。因此，#1代EGFR-TKIs抑制剂吉非替尼先后在欧洲和中国更新了其药品说明书，将ctDNA检测EGFR突变作为伴随诊断。在肿瘤标本不可评估时，可以使用敏感可靠的检测方法，以获取的血液(血浆)ctDNA作为突变检测标本。

(2) 可以进行疗效的动态监测。FASTACT2研究分别在治疗前(基线)、治疗第三周期(C3)以及疾病进展(PD)分别采集外周血进行连续样本分析，监测cfNDA和血浆突变DNA的动态定量变化。发现血浆游离DNA和EGFR突变特异性DNA在C3降低，并在治疗进展时又再次升高。

(3) 提前预知耐药相关基因的出现。2015年ASC0上的一项报道显示，61例EGFR-TKIs治疗疾病进展的患者共采集了227份血浆样本(从基线开始每2个月采集一次血浆样本)，采用微滴数字PCR检测cfDNA突变。结果发现血浆和肿瘤组织L858R检测的一致性为88%，19DEL检测一致性为78%;所有样本均显示血浆EGFR突变拷贝数在治疗后的前2个月明显减少(大于50%)，约在治疗后3〜13个月15例患者在影像学出现疾病进展前检测到T790M突变。

2.检测方法鉴于cfDNA/ctDNA的特点，要求检测方法具备高灵敏度和高特异性。很多突变检测方法都在尝试用于cfDNA/ctDNA的EGFR突变检测。

图1 cfDNA/ctDNA检测EGFft突变的方法比较

目前，在中国和欧盟已获批上市的基因突变血液检测试剂盒采用的都是ARMS-PCR法。FASTACT2、IFUM等临床研究证实，赴美就医机构爱诺美康介绍，对于晚期NSCLC患者，可以通过血浆样本评估其沉仲突变状态。

FASTACT2研究采用cobas-PCR检测血液样本突变状态，与配对组织样本的检测一致率为88%，敏感性达到75%，特异性为96%。

在IVIFUM(易瑞沙后续评估)研究中，采用ARMS法检测了652例NSCLC癌患者血液与配对组织突变状态，发现血液和组织样本突变检测的一致性是94.3%，检测敏感性是65.7%，特异性达到99.8%。血液检测突变阳性患者的客观缓解率与组织EGFR突变阳性患者一致，血液检测19外显子缺失阳性患者的无进展生存时间也与组织的相一致。这说明ctDNA检测抓仰突变可以用来指导EGFR-TKls治疗。另一项来自中国的研究发现，对86例未经EGFR-TKIs治疗的NSCLC患者采用ARMS法检测血液与组织配对样本的EGFR突变，两者的符合率为84.9%,敏感性达到64.9%，特异性为100%。因此，ARMS法对于血液EGFR突变检测而言特异性较好，但是敏感性有限。对于无法获取肿瘤组织的患者而言，可以选择ctDNA检测EGFR突变以指导临床用药。

赴美就医机构爱诺美康介绍，除了ARMS-PCR外，很多其他检测方法也尝试用于血液突变的检测，包括数字PCR(dPCR)、BEAMing、二代测序等，但目前仍处于研究阶段，用于临床之前尚需要更多数据的支持。