乳腺癌患者尿液中8-oxo-dG作为氧化应激标志物及DNA修复

现用于检测DNA碱基损伤的检测手段，包括气相色谱/质谱法（GC/MS)、高效液相色谱电化学法（HPLC-EC)、32P后标记法（post-labelling)、彗星（Comet)检测及其他的一些检测方法。

因为其敏感性及准确度高，GC/MS和HPLC-EC被认定为检测8-oxo-dG的金标准。但色谱分析本身时间长，操作繁琐，费用高且需要配备有经验的技术人员，在常规医院很难利用色谱分析来检测样本，在20世纪90年代后期开始出现基于ELISA原理的检测方法。之后，发现ELISA检测方法显示非特异性反应，不能用于临床检测。

2001年，我们首次公布了关于乳腺癌患者尿液中8-oxo-dG作为氧化应激标志物及DNA修复的文章。将接受放疗后有严重皮肤反应的乳腺癌患者（辐射敏感人群）与非敏感人群各自尿液中8-oxo-dG的水平进行比较。

这个研究的目的是为了预测是否尿液中的8-oxo-dG能够区分乳腺癌患者在接受放疗后是辐射敏感患者还是辐射非敏感患者。结果显示在进行放疗前辐射敏感患者就已存在氧化应激。

由于放疗会增加活性氧的含量，从而导致修复蛋白的减少而进一步导致DNA损伤的累积，在临床鉴别为辐射敏感。由于缺少有效的修复蛋白及由放疗引起的活性氧额外增加而导致DNA损伤累积，可引起放射敏感性的临床征兆。这个研究是基于HPLC-EC方法进行的，因操作繁琐很难在临床开展。

另一种方法是采用ELISA测量8-oxo-dG。ELISA试剂盒敏感、快速，不需要精密的设备。

在2000年左右，众所周知，市面上流行的8-oxo-dG商用检测试剂盒，用的单克隆抗体并不能专一特异性识别8-oxo-dG,甚至会与其一些衍生物，如8-氧代-鸟苷（8-oxo-Guo,来源于RNA)及其他化合物反应。这个8-oxo-dG试剂盒的有效性被质疑。

2002〜2005年，基于竞争性酶联免疫吸附方法，我专注于研究开发这一新技术特征，以及检测在尿液或血清中8-oxo-dG的真实的特征意义，以克服在检测如尿液或血清这样复杂生物材料中8-oxo-dG非特异性反应的难点。这一新的试剂盒研发成功，为敏感和非侵人性方法的发展奠定了基础。它可快速、方便地检测人类/动物生物材料(血液、尿液和唾液)及细胞培养基中的氧化应激水平。这种方法已在全球范围内建立了应用。该方法灵敏度高，特异性强，可应用于细胞培养液中，研究8-oxo-dG从细胞内向细胞外环境排泄的分子机制。通过研究得知8-oxo-dG的释放与MTH1酶[Nudix结构水解酶1(NUDT1)，也称为Mutt的同系物1,MTH1]有高度相关性。我们还证明MTH1在氧化应激过程中起着非常重要的抗诱变作用。

文献报道，以往试剂盒中存在抗体免疫交叉反应，所以我们又增加了纯化样本步骤。为了验证我们的试剂盒，选取了15例人血清，按照操作步骤进行纯化。纯化后对样本使用两种不同的方法，即ELISA试剂盒和基于两步色谱法的HPLC-EC，测量其8-oxo-dG的含量。通过对两种方法结果的比较得出，ELISA试剂盒的截距为0.25ng/ml，灵敏度大约为HPLC-EC的50%(斜率线：0.4)。ELISA的重复性实验的标准差为±20%(数据来源基于3次重复实验。

测定的灵敏度和特异性分别为0.80和0.96，曲线下面积（AUC)为0.93，证明此ELISA方法能够应用于体检筛查（应用于体检的检测方法的AUC值需要达到0.90〜0.95)。

此制备步骤和方法的灵敏度允许人们可以检测人体液体中的8-oxo-dG，特别是血清和唾液。更新的ELISA方法为相关研究领域的合作开辟了新的可能性。以下是我所在研究团队使用新的ELISA在一些重要研究领域中的实例。这些案例支持了“改变生活方式，防止疾病发展和衰老是非常重要的”论点。