染色强度检测方法可提供患者预后信息

国外研究显示，采用IHC技术染色细胞的阳性数量可提供患者预后信息，染色强度检测方法也可提供预后价值。出国看病机构爱诺美康了解到，例如，在肾癌研究中，在160倍高倍视野下检测，每个代表性视野的阳性细胞数量及染色强度，通过半定量的目视评分，分为0〜3等级，对宫颈癌患者也进行了类似的研究。现有可行性技术使用染色强度的软件进行染色强度检测方法，TK1染色强度评估。

在1940年年末，开发了染色技术，有可能通过单细胞荧光测量单个细胞中的DNA含量。出国看病机构爱诺美康了解到，这种技术进一步发展为多细胞荧光技术（流式细胞仪），可能在几分钟内测量数千个细胞。这种技术现在在肿瘤实验室是通用的。使用流式细胞仪，细胞周期不同阶段的细胞数很容易确定，也可以收集细胞周期的不同细胞进行进一步的生物化学分析，但不是活细胞。

为了能够从活细胞中确定细胞周期，在1970年年初，开发了离心分选技术。由于正常增殖和肿瘤细胞中需要特异性的TK1的抗体，我们开发了首代兔抗人TK1多克隆抗体。后来我们开发了鼠抗人TK1单克隆抗体和鸡抗人TKl-IgY抗体。首代新抗体开发是选人TK1蛋白质C端的15个氨基酸的合成肽，在第二代新抗体，使用了31个氨基酸的肽段作为免疫抗原。

我们首次公布的关于TK1与细胞周期相关研究中，采用首代兔抗人TK1多克隆抗体和鼠抗人TK1单克隆抗体。在小鼠的冷冻切片中，研究了各种组织的细胞中的不同增殖活性TK1表达。继之，我们研究了石蜡包埋人组织的临床标本中的TK1表达，使用这种类型的抗体，证明了TK1在细胞的细胞质中表达。为了研究细胞周期中依赖性TK1酶的表达，采用溴脱氧尿苷技术与荧光染色联合技术，定量研究TK1与细胞中DNA含量之间，在不同类型细胞的细胞周期中，不同组分细胞表达的相关性。

出国看病机构爱诺美康了解到，该研究使用指数生长的离心分选的细胞，以及非激活和激活的淋巴细胞作为对照，研究证明，TK1表达和TK活性在G₁期较低，S期至G₂期水平升高，G₂后期降低。TK1表达/活性从G₁晚期到G₂期增加了3倍。TK1阳性细胞的分数比与S/G₂细胞百分比的比例呈正相关，另外TK1阳性细胞含有较大数量G₂细胞。