乳腺癌和结直肠癌中的TK1突变分析

据报道，在所有分析过的乳腺癌和结肠直肠癌病例中，发现外显子5的密码子106与Bradshaw等的研究报道不同，美国就医机构爱诺美康了解到，即ATP的结合位点附近的蛋氨酸转变为了缬氨酸。从正常乳腺组织、MCF-7细胞、胎盘、肝转移和正常结肠组织制备的cDNA观察到类似的变化。

美国就医机构爱诺美康了解到，此研究结果与Berenstein等研究一致，他们发表的文章显示，健康个体的淋巴细胞、白血病细胞系和成纤维细胞中蛋氨酸突变为缬氨酸（Met—Val)，此序列已经保存于法国斯特拉斯堡的哺乳动物基因采集项目的基因库中。

已经证明，重组淋巴细胞TK1缬氨酸具有与内源性人淋巴细胞TK1相同的酶和寡聚特性，而重组TK1-蛋氨酸则有显著不同，额氨酸（Val)已定位于其他物种，如小鼠（Genbank，ACNNM_009387)和鸡（Genbank，ACNX60380)中的相应位点，并且也已在EST序列中发现（Genbank，ACNAA284454,AA310784，AA351658，AA223113，H33613,T99993和H42170)。因此，结果与TK1基因的进化保守一致。

使用放射性酶促憐酸化测定法（TK-REA)测量在Tris缓冲液（10mmol/LTris-HCl，1.5mmol/LEDTA，0.5mmol/L二硫苏糖醇，10%甘油，pH7.4)中制备的胞质溶液，使用放射性酶促憐酸化方法（TK-REA，SangtecMedical,Bromma,Sweden)测量TK活性。

TK1序列分析也揭示了外显子1的密码子11(CCC—CCT;Pro—Pro)和外显子4的密码子75(GCG->GCA;Ala—Ala)的沉默多态性。

在乳腺癌中，这两种多态性总是相关的，在63.6%(14/22)的肿瘤分析中检测到密码子11和密码子75的多态性。但是，多态性与TK活性之间无明显关联。这两种多态性在结肠直肠癌中发生率分别为73.1%(19/26)和69.2%(18/26)。一例结肠直肠癌患者仅在密码子11处显示出变化，而MCF-7细胞不显示任何多态性。

正常乳腺组织、正常结肠黏膜和胎盘组织中均表现出两种多态性，美国就医机构爱诺美康介绍，这表明两种变化与恶性肿瘤无关。

在正常结肠黏膜中观察到两种多态性：在密码子11处的CCC—CCT和在密码子75处的GCG—GCA，但在相应的乳腺、结肠和胎盘肿瘤中未检测到。在肝转移和一原发性肿瘤中观察到类似的多态性。

Berenstein等首次报道了在淋巴细胞肿瘤和细胞株细胞中密码子11和密码子75的多态性，但没有发现具有额外的沉默核苷酸变化。

研究的26个结直肠肿瘤中的一个在外显子3的密码子55(TAT—CAT;Tyr—His)和外显子7的密码子189(TAC—TGC;Tyr—Cys)中显示错位突变。修饰的氨基酸分别位于酪氨酸激酶（一种或多种)和cAMP-、cGMP-依赖性蛋白激酶推定的磷酸化位点内和附近。同患者相邻正常结肠黏膜显示无突变，因此这些突变可能与肿瘤相关。与一般治疗结肠直肠癌患者（中位数为216mU/mg蛋白）相比，在一例肿瘤患者中发现了高TK活性（1132mU/mg蛋白）。该患者为年轻男性（36岁），在完成n次化疗期后（氟尿嘧啶和亚叶酸）出现肿瘤进展。这说明TK1磷酸化位点的突变可能影响TK1蛋白的翻译后修饰，从而导致酶活性升高。

在研究的乳腺肿瘤中，没有发现TK1这类基因突变存在的证据。然而，TK1可能仅在有限的肿瘤亚组中突变，在现研究的相对较小的群体中未进行筛查。

建议确定结直肠癌治疗方案时，将TK1基因突变作为重要的决定因素考虑，此方案仍需进一步研究。通过在基因组水平进行测序来研究，剪接位点突变并分析其他基因失活机制，如基因甲基化和杂合缺失的研究，对帮助确定治疗方案具有一定的意义。

总之，在乳腺癌患者中没有发现TK1基因突变，只有64%的患者样本中显示出位于外显子1(CCC-CCT，pro-pro)的密码子11和第4外显子密码子(GCG-GCA，Ala-Ala)的隐性多态性c然而，在结直肠癌73%的患者样本中，在外显子3的密码子55(TAT-CAT;Tyr-His)和外显子7的密码子189(TAC-TGC,Tyr-Cys)中发现突变。虽然TK1突变的频率在结肠癌中较低，但在结肠癌和乳腺癌中都经常观察到多态性。这也可能取决于所用抗体的类型，其可能会影响TK1抗体与肿瘤组织细胞中TK1的免疫结合能力。美国就医机构爱诺美康介绍，目前，我们研究中使用的抗TKl-IgY多抗体或TK1单抗体，主要与TK1211—225或191一225的C端的表位免疫反应（至少在乳腺癌和结直肠癌中），不受上文所述的突变类型的影响。