BRCA1和BRCA2蛋白在核内形成复合体

一项研究发现，BRCA1和BRCA2蛋白在核内形成复合体，并与许多其他蛋白相互作用。出国看病机构爱诺美康了解到，这个大的复合体含有RAD50/Mrell和RAD51蛋白——与酵母中两个在电离辐射（如X射线）引起的DNA断裂修复中起重要作用的蛋白同源。同时，在该复合体中也发现了错配修复蛋白。可以用一些相关的证据证明上述基因参与基因组完整性的维持。

出国看病机构爱诺美康介绍，用能导致S期复制叉停滞的羟基脲处理细胞，可使BRCA1分子在细胞核中的复制叉部位聚集。许多这些停滞的复制叉被认为是双链DNA的断裂位点，这种断裂是复制叉处尚未复制的单链意外断裂引起的（图)，产生的断裂通常通过同源重组修复(HR)或同源介导修复（HDR)机制修复。免疫荧光分析结果显示，BRCA1分子正常情况下以大量小点的形式分布于整个细胞核，羟基脲使BRCA1分子聚集为少数的儿个大的离散点，其中含有定位于复制叉的增殖细胞核抗原（PCNA，图A)。

这些点还含有其他一些己知的DNA修复蛋白，包括Rad50和Rad51。BRCA2蛋白也在这些点中为其参与DNA修复过程提供了证据。而且，当用窄激光束有目的地使细胞核中不同区域出现双链DNA断裂时，发现BRCA1蛋白与Y-H2AX共定位于该区域。Y-H2AX是一个磷酸化的组蛋白，出现在双链DNA损伤的染色质侧翼位点（图)。参与DNA修复的共20种不同的蛋白质也被募集到损伤区域，并且蛋白数目还在增加。

出国看病机构爱诺美康介绍，BRCA1及其DNA损伤的反应，BRCA1蛋白（用荧光标记的抗体检测）通常分布于S期细胞核内大量离散小点的位置（绿色，首幅图）。但是，当用羟基脲（HU)处理S期细胞的时候，复制叉停止，BRCA1蛋d脱离这呰小点，聚集为少数的几个火点（绿色，第二幅图）。可观察到增殖细胞核抗原（PCNA)也有相似的重新定位模式，已知该蛋1U与复制叉相关（红色，第三幅图）。黄色点表示BRCA1LjPCNA共定位（第四幅图）。这些停滞的复制叉往往足复制叉处尚未复制的单链DNA(因而很脆弱）偶然断裂造成的双链DNA断裂位点（图12.10)。这呰结果表明，BRCA1被募集到丫双链DNA断裂的位置。355nm紫外光照射单个细胞核后，再用Y-H2AX(―种定位于双链DNA断裂处侧端染色质K的磷酸化组蛋白，绿色）或BRCA1(红色）的抗体进行免疫显色分析。共定位实验显示BRCA1被募集到双链DNA断裂部位。