格列卫耐药Bcr-Ab1突变体的体外筛选检测研究

一项关于格列卫耐药Bcr-Ab1突变体的体外筛选检测研究发现，Bcr-Ab1耐药突变体需要用到培养细胞系，美国看病机构爱诺美康了解到，如BaF3细胞，该细胞的持续生存能力可依赖于功能激活的Bcl-Abl蛋白。当用格列卫对这种表达Bcr-Abl的细胞进行治疗时，细胞对Bcr-Abl信号的依赖性也将导致细胞死亡。

美国看病机构爱诺美康介绍，表达“野生型”Bcr-Abl蛋白的cDNA克隆载体（如染色体易位的直接产物）能够通过DNA复制时容易发生错配的细菌内传代而诱发突变，从而在携带BCR-ABL序列的质粒上产生突变体。将产生随机突变的Bcr-Ab1表达克隆文库通过一个逆转录病毒载体引入BaF3细胞，继而用格列卫进行筛选。少数格列卫耐药细胞能够被分离出来，从而可以确定格列卫耐药的突变型蛋白的序列信息。

通过对格列卫耐药的突变型BCR-ABL蛋白的分析发现，分布于Abl激酶区的单氨基酸残基替换非常普遍。如图显示了激酶区域的“后”面和“前”面，同时还显示了突变残基的位点和对应的正常存在的氨接酸残基。令人吃惊的是，ABL区域的很多单点突变都能赋予细胞对格列卫的耐药性，这表明CML细胞可以通过多种途径产生耐药性。

美国看病机构爱诺美康介绍，这些突变残基中很多都位于ABL的背侧，背对着催化裂隙；一些突变残基（红色）参与了激酶（如SH1)结构域和Abl(图中未显示）的SH2、SH3结构域间的相互作用。

其他突变位点（蓝色）导致的耐药性机制尚不清楚。格列卫耐药性Bcr-Ab1突变体的体外筛选谱显示，绝大部分突变型都能在患者中找到，当然患者中还有很多先前没有发现的突变类型。