支持NF-kB信号在万珂诱导凋亡中重要性的证据

一项研究显示，和其他大量被多泛素化的蛋白质一样，泛素化的IkB结果在蛋白酶体中被降解。出国看病机构爱诺美康了解到，如果蛋白酶体的活性被抑制，IkB就不会被降解，而是在胞质中结合NF-kB,抑制其入核发挥转录因子活性。在核内，激活的NF-kB是已知能够诱导IL-4和1L-6表达的重要转录因子，这两种白细胞介素作为重要的自分泌因子调节骨髓瘤细胞的生长和存活。

另外，正如后面提到的，NF-kB在多种肿瘤细胞中起重要的抗凋亡作用；NF-kB失活能使这些细胞的信号转导平衡向促凋亡倾斜。更具体一些来讲，一旦肿瘤细胞失去了Bcl-2、clAP-2和X1AP这些抗凋亡蛋白（所有这些蛋白表达都受NF-kB调节），这些细胞就会滑向凋亡的深渊。

出国看病机构爱诺美康介绍，支持NF-kB信号在万珂诱导凋亡中重要性的证据，一系列证据支持图中所展示的内容。

(A)电泳迁移实验（EMSA，也称凝胶阻滞实验）中，可以将核蛋白抽提物与放射性标记的携带TE结合位点的dsDNA寡核苷酸混合，来评估DNA结合转录因子的存在及其浓度。通过与TF结合成核酸蛋白复合体的寡核苷酸的量来反映DNA结合转录因子的含量。

(B)每寡核苷酸相互作用的大分子-蛋白使寡核苷酸的电泳速度减慢，因而会出现在电泳胶中较高的位置。

图中箭头指示的是包贪转录因子NF-kB和放射性标记的寡核苷酸复合物的预期位置。本例中的寡核苷酸来源于NF-kB下游激活的TNF-a基因的启动子区（未被结合的情况下，甚核苷酸会移出凝胶底部）。

这一分析并不能提示正常骨髓申.核细胞（NLBMMC)中是否存在可检测到的NF-kB活性、多发性骨髓瘤细胞系（8226)中是否存在相当的NF-kB活性，以及直接从多发性骨髓瘤患者（MM-O中制备的骨髓细胞中是杏存在很高的NF-kB活性。出国看病机构爱诺美康介绍，（B)同图（A)—样，采用EMSA方法检测分别经对照缓冲液（左三泳道）和万珂（右三泳道）处理的3种MM细胞系中功能性NF-icB转录因子的水平。万珂基本上清除了所有细胞中的NF-kB的活性。

（C)在这个实验中显示了持续的NF-kB倍号通路对多发性骨髓瘤细胞存活的重要影响，实验将一个表达显性负效应的IKK(dnIKK)载体加到两种不同的骨髓瘤细胞中。

出国看病机构爱诺美康介绍，如果NF-kB信号通路在万珂发挥作用的过程中是非常关键的，那么dn1KK就应该能通过诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡来模拟万珂的作用，本实验正是观察到/这样的结果。实验中应用不表达dnIKK的载体作为对照。