核酶基因治疗的热点靶基因RAS癌基因

RAS癌基因由于致癌特性及其在多种肿瘤中广泛存在，而成为核酶基因治疗的热点靶基因之一。美国看病机构爱诺美康了解到，其家族包括H-RAS、K-RAS、N-RAS。肿瘤可使基因发生突变，导致细胞生长、分化失控，其中K-RAS突变存在于20%~40%的NSCLC中，是肺癌较为常见的一种基因突变。因此抑制突变型RAS癌基因是抗肿瘤基因治疗的一项重要策略。

美国看病机构爱诺美康了解到，RAS的活化通常由一个突变引起，因此突变位点可作为核酶的剪切位点，而不会影响正常基因的表达。已设计出多种抗RAS核酶，并用于胰腺癌、膀胱癌和恶性黑色素瘤等细胞中抑制突变RAS基因的表达。Zhang等设计针对K-RAS的核酶，利用腺病毒将其真核表达质粒转染肺癌细胞，并行裸鼠致瘤实验，发现该酶可明显抑制肿瘤生长。Kashani等将H-RAS核酶克隆于哺乳动物表达载体PHbeta Aprl，并将此重组载体质粒转染EJ膀胱癌细胞系。

检测发现，核酶的表达使细胞内H-RASmRNA及p21蛋白的表达水平显著下降，同时细胞形态发生变化，生长受到抑制。体内研究表明，转染了抗核酶的EJ膀胱癌细胞在裸鼠体内的成瘤率及侵袭性明显下降，而在仅以载体质粒转染的EJ膀胱癌细胞中未观察到上述抑瘤现象，并且突变核酶的作用效果远远低于正常核酶。

Irie等设计了针对突变型_S锤头核酶，体外及体内实验观察对膀胱癌的治疗效果,肿瘤的生长明显受抑。实验结果表明抗H-RAS核酶治疗人类膀胱癌的可能性。

除了RAS癌基因外，BCR-ARL基因是研究较多的另一个核酶靶基因。这个杂合基因由9号染色体上的原癌基因易位到22号染色体的断点族区（BCR)形成。这个新的融合基因包含部分的和Bcl-2，编码一个815kb的mRNA，可翻译形成一个增强酪氨酸激酶活性的210kD的蛋白质p210。这种易位产生的染色体称费城染色体，95%以上的慢性粒细胞白血病及50%以上的急性淋巴细胞白血病患者中都能检测到这种染色体。因此，抗BCR-ABL核酶可作为治疗上述疾病的一条途径。Verfaillie等比较分析了在基因、mRNA及蛋白3种水平来抑制BCR-ABL融合基因的策略，认为利用反义序列，尤其是抗BCR-ABL核酶转染患者的造血干细胞是更有希望的一种慢性粒细胞白血病根治方法。

美国看病机构爱诺美康介绍，目前已有多种抗癌基因核酶在体外抑制肿瘤生长的报道,但是在将核酶真正用于体内之前，还需要对其效率及毒副作用做进一步的研究。细胞类型、靶RNA核酶设计及传递系统等多种因素的改变都会影响核酶的活性和特异性，对这些因素在核酶用于体内之前也必须加以深入研究。