溶瘤腺病毒的作用机制

许多DNA病毒(腺病毒、SV40、HPV16等)能产生一些蛋白作用于宿主细胞的细胞周期调节蛋白，从而改变宿主细胞的细胞周期，使静止期的细胞进入细胞周期以利于病毒DNA的复制。不同的病毒影响细胞周期的机制不同，腺病毒主要通过Rb和P53细胞信号通路干扰宿主细胞的细胞周期。

(―)Rb和p53细胞信号通路

E2F蛋白能激活促使细胞进人S期。磷酸化Rb蛋白不能与E2F蛋白结合，从而失去抑制E2F蛋白启动DNA合成的作用，细胞进入S期而发生增殖。与此同时，E2F也促进P14ARF和cyclinE等物质的产生，其中pl4ARF通过MDM2(泛素连接酶途径)减少P53降解并在核仁周围聚积。p53与细胞周期停止基因和凋亡诱导基因（如P21WAFI和Bax基因等)上游的P53反应子结合，从而阻止静止期细胞进人细胞周期或诱导细胞凋亡。通过Rb和p53细胞信号通路，宿主细胞的分裂增殖处于动态平衡。

(二）腺病毒对细胞周期的影响

腺病毒的复制需要细胞从G1期进入S期，腺病毒感染宿主细胞后，其早期蛋白ElA与宿主的Rb结合释放游离E2F，使细胞由G1期进入S期；随着E2F的激活也被激活。p53蛋白使细胞周期阻止在G1期或诱导细胞凋亡。然而腺病毒同时编码产生ElB55k和ElB19k，两种蛋白分别抑制P53和Bax，使宿主细胞的分裂增殖不受P53细胞信号通路所抑制，终期使细胞周期进人S期，腺病毒得以大量复制繁殖。去除或基因的腺病毒在Rb和P53细胞信号通路正常的宿主细胞无法进行复制增殖，只有在Rb或P53信号通路异常的肿瘤细胞才能增殖使细胞受损。溶瘤腺病毒是基于此原理产生的。目前溶瘤腺病毒的构建主要通过基因工程的方法敲除腺病毒基因组上的部分基因（如E1A或E1B等)或将肿瘤特异性启动子置于主要复制调节单位(如E1A)前构建而成。

(三）改造病毒基因组提局溶瘤效能

溶瘤腺病毒能够更大程度发挥抗肿瘤效应的关键是能有效杀死肿瘤细胞并迅速在肿瘤内部扩散。因此需要对病毒基因组进行特定的改造，包括致细胞死亡蛋白的过表达及病毒抗凋亡蛋白（ElB-19k)功能失活等。改造病毒如AdH5dL118(缺乏ElB-19k和Elb-55k蛋白)、Ad337(缺乏ElB-19k蛋白),无论是体内外均能显示出显著的溶瘤活性。同时Elb-19k缺失病毒还能提高肿瘤细胞对化疗的敏感性。此外，通过在幻基因的E3-11.6k上游插入一个额外的主要后期启动子也可实现E3-11.6k过表达，在不影响病毒复制的情况下提高溶瘤活性。