肺癌EGFR-TKI获得性耐药突变T790M的研究

一项研究显示，采用Western杂交方法检测其磷酸化EGFR的表达情况，结果显示发生T790M突变的细胞对吉非替尼产生了耐药性。美国看病机构爱诺美康了解到，2005年2月24日Kobayashi等首次对1例治疗前组织中有delL747-S752位点缺失突变、接受吉非替尼二线治疗达完全缓解，28个月后疾病进展的71岁患者进行了二次活检，分析其活检组织基因EGFR突变状况，发现在原有突变基础上EGFR发生了新的基因突变，即在20外显子790位上密码子发生了错义突变(T790M)，从而使重新处于激活状态。

美国看病机构爱诺美康了解到，研究者因此认为获得性耐药源自T790M突变引起酪氨酸激酶域空间构象改变。使790号位上的苏氨酸变为甲硫氨酸(T790M)。790号位上的苏氨酸残基作为受体酪氨酸激酶结构域的催化性ATP结合位点深处的“守门者”。

庞大的甲硫氨酸侧链在立体结构上可阻碍酪氨酸激酶抑制剂，影响其与吉非替尼、厄洛替尼的结合，此外继发突变也极大地减弱了EGFR-TKIs与激酶域之间氢键的亲和力。将构建的T790M突变片段转染至COS-7细胞内，用不同浓度的吉非替尼(0~2.0mol/L)处理转染细胞。

美国看病机构爱诺美康了解到，2005年Pao等通过检测6例疾病进展后原发与转移活检标本突变及突变情况，发现其中3例存在T790M错义突变。治疗前及疾病进展后的标本均无KRAS突变，同时采用PCR-RFLP验证了上述结果，为进一步证实T790M是否为原发性突变，作者回顾性研究了155例NSCLC患者治疗前肿瘤组织EGFR，结果无一例携带T790M突变。

Pao同样对携带L858R+T790M两种突变和L858R单一突变的细胞株的抗药性进行比较，结果显示前者的抗药性是后者的100倍。

2006年8月Inukai等应用一种使T790M突变富集的高敏感性PCR检测手段从280例未经EGFR-TKIs治疗的肺癌患者中发现9例T790M突变(用传统直接测序仅检出1例)，其在原发性耐药患者中比例显著增高，并随着EGFR-TKIs治疗而选择性克隆增长，提示20外显子T790M和两大热点突变19外显子缺失以及21外显子L858R之间，除了耐药和敏感的差别外，可能也是两类起源完全不同的突变。其观点基于以下证据:T790M在中晚期发生率高于早期，而19外显子缺失和L858R无TNM分期差异;T790M多于EGFR-TKIs耐药患者中检出，初治患者检出率极低，而19、21外显子突变无此规律;用突变富集的高敏法和传统直接测序法19外显子缺失和21外显子L858R的检出率差异不大，而高敏法T790M检出率10倍于直接测序;与两大热点突变不同，T790M和性别、吸烟状态和病理表现等人群特征并无关联。

2014年ASC0会议上报道了一项T790M异质性状态和EGFR-TKIs耐药之间关系的研究，研究纳人了66例EGFR-TKIs获得性耐药疾病进展(PD)的非小细胞肺癌患者。

建立高灵敏度数字PCR方法检测血浆中突变，在EGFR-TKIs类药物初治NSCLC患者中验证了其检测cfDNA的高灵敏度和特异性。通过该方法检测患者血浆cfDNA中的T790M。

美国看病机构爱诺美康介绍，研究发现，66例post-PD患者中检测出36例EGFR-T790M(54.5%)。36例中10例T790M阳性患者，5例(50%)在PD前1.5-3.5个月就可以检测到T790M阳性。然而36例T790M阳性患者中有30例(83.3%)是T790M并存一个敏感突变。此外，在少数接受过化疗加TKIs后PD的患者中，敏感突变和T790M的动态定量变化初步显示，即使在双突变的情况下，T790M和敏感突变DNA可能并不总是来自同一肿瘤细胞群，T790M突变的异质性水平可以影响EGFR-TKIs耐药的NSCLC的化疗结果。

该项研究表明，血浆cfDNA无创监测可在临床PD3.5个月前从血浆中检测T790M。在肿瘤细胞中，T790M可能具有或不具有五以及敏感突变，它的异质性状态可能会影响EGFR-TKIs耐药的NSCLC化疗的结果。